STR检测
短串联重复(Short tandem repeats, STR),自贡pcr,又称微wei星DNA(Microsatellite DNA)或简单重复序列(Simple repeat sequence, SRS或SSR),是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中DNA链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致STR产生的较为常见原因,并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间,fu制滑动发生的概率也不相同。
STR是以序列 (core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个STR的序列结构相同,长度为2-6bp,但其重复单位数目和重复区域的长度不同,因此STR在不同种族、不同人群之间的分布具有差异性,构成了STR遗传多态性。不同个体之间在一个同源STR位点的重复次数也不同,因而同指纹识别一样,STR位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点的特定序列重复,即可创建其基因档案。基于此,STR分析法已经成为一种重要的鉴定分析方法,实时荧光定量pcr,应用于法医学、qin子鉴定及细胞鉴定等领域。
二、使用说明
1、装载探针
对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞。对于细胞刺激
时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞,dna检测,后装载探针。
原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。
常规碱基分子量:
11.如何溶解引物?
答:干燥后的引物质地非常疏松,开盖前好离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种条件下不稳定。
12.如何保存引物?
答:引物合成后,PCR实验室,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前,室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。
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