流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,细胞实验外包公司,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。
细胞ELISPOT检测
1.培养板的预处理:在24孔培养板内加0.5ml 0.2%戊er醛,37℃,4h,弃掉板中的处理液,用PBS洗涤3次,每次3min;
2.抗原包被:将适量抗原溶于包被缓冲液中,每孔加入0.5ml,4℃过夜,PBS-T洗涤3次,每次3min;
3.制备细胞悬液:将待测已致敏小鼠处死,取出pi脏,置于加有Hanks液的平皿内,用钝头直角9号zhu射器针头破少许脾被膜后,赶出细胞,细胞实验外包选哪家,用毛细吸管轻轻吹散细胞团后,将悬液通过250目尼龙网,细胞实验外包费用,取滤液,1000r/min离心5min,Hanks液洗涤3次,计数细胞后,用1640液重新悬浮细胞,配成所需浓度;
4.往各孔中加入0.5ml含不同浓度(104-106/ml)的细胞悬液,置37℃,5%CO2条件下孵育2-4h,弃掉培养液,PBS-T洗涤3次,每次3min;
5.往各孔中加入0.5ml生物素化抗ti(Bio-Ab)(2μg/ml),37℃孵育1h或4℃过夜,弃掉液体,PBS-T洗涤3次,每次3min;
6.加入辣根过氧化物酶结合的亲合素(Avi-HRP)(2μg/ml),37℃孵育30min,弃掉液体,PBS-T洗涤3次,每次3min;
7.配制明胶-底物液:在37℃水浴中,将2.5mlTMB溶液(4mg/ml jia醇溶液)滴加入7.5ml10%明胶溶液(用pH5.0磷酸钠-柠檬酸缓冲液配制)边加边搅,溶液呈白色,加入14μl 3% H202;
8.显色与计数:将培养板底冰浴,每孔加入0.6ml明胶-底物液,约3min,咸阳细胞实验,混合液凝固,将培养板取出,置室温5min,将板倒置,用肉眼和低倍放大镜计数所显示出的颜色的斑点。
Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8【化学名:2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,是一种类似于MTT的化合物,它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯(1-Methoxy PMS)存在的情况下,被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物(formazan)。细胞增殖越多越快,颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅,对于同样的细胞,颜色的深浅与活xi胞的数量成正比,因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
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