细胞培养中常见的污染及解决方法
支原体污染
支原体是隐蔽的污染物,不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象,比如细胞病变和浊度或 pH 值变化(即使在严重污染的培养基中),这样就会导致我们产生错误的安全感。而在牛中,支原体是常见的微生物之一。
解决方法:通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染,特别是对重要的细胞系,必须去除支原体,细胞分化,一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是,支原体很突出的结构特征是没有细胞壁。因此,转染,它对作用于细胞壁的生物合成(如 β-内酰胺类、万古等)完全不敏感,并且通常对多粘菌素、利福平和类具有耐药性。相反,四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强,而氨基糖苷类和氯的抑制作用较弱。
流式细胞分选
流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的--种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单ke隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。硬件中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。
Q:如何避免中沉淀物的出现?
A:首先要注意正确的解冻步骤,而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加,细胞培养技术,使用中应该尽量避免:
(1)热灭活;
(2)在 37℃ 下培养;
(3)反复冻融;
(4)γ 射线照射;
(5)长期储存在 2-8℃;
(6)在室温下放置时间过长
Q:如何去除中的沉淀?
A:如想去除这些絮状沉淀物,可以将分装到无菌离心管中,细胞,以 400g 离心,上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。
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