难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，可以做动物实验的公司，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，基因敲除，不能偏右使灌注针插入右心室。
5. 剥夺杆睡眠剥夺法
在标准实验室笼中采用间隙性的剥夺杆扫描进行触觉刺激来干扰自由行为的小鼠。该方法防止了人类接触和干预对睡眠剥夺的影响，并且在整个睡眠剥夺过程期间小化身体活动。此外，该程序准确且可预测。实验室动物从小都是在饲养笼中长大，基于实验室饲养笼使得动物能够保持在正常的社会环境中实施了一种相对无压力的方法来诱导动物睡眠剥夺模型，从而避免了外界环境及其他因素对睡眠剥夺的影响。此外，基于饲养笼式的睡眠剥夺仪易于组装和清洗，设计更加地人性化。
灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！
小鼠灌注
灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头 (4 号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约 40 毫升生理盐水，后再灌流约 20 毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。
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小鼠灌注
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