难点与关键点
将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，动物模型，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。
2强迫运动睡眠剥夺法
此类睡眠剥夺方法形式多样，在脑电监护情况下可行全部的睡眠剥夺和选择性的睡眠剥夺。其共同特点是通过动力装置迫使大鼠不停地运动，从而达到睡眠剥夺的目的。此类方法的优点是睡眠剥夺效果明显，动物实验，睡眠剥夺的时间及强度易于掌握，重复性好，无须实验人员随时观察实验情况，减轻了实验人员工作强度。缺点是长时间运动引起机体的一系列应激反应可能干扰睡眠剥夺的实验结果，现选取其中两种有代表意义的方法介绍如下
2.1水平转盘睡眠剥夺法
此方法应用广泛，于 1983 年先应用在睡眠剥夺实验中，实验装置由一个电脑控制台、一个水平转盘及两个开放的长方形有机玻璃缸组成，转盘直径为 46 cm，在电脑控制下可以按顺时针逆时针方向随机水平转动! 两只有机玻璃缸的尺寸均为长60 cm ，宽20.5 cm，高 60 cm 。在距离缸底 5 cm 处的缸侧壁开有一条缝隙，使转盘的一半能分别从缝隙伸入两只玻璃缸中并能随意转动。缸底留置水约 2 cm 深，转盘离水面约3 cm 实验前1周将睡眠剥夺大鼠头颈部植入微电极" 并将微电极与电脑控制台相连，将大鼠放在转盘上适应环境1周，每天约1 h让大鼠习惯在转盘上活动，动物模型实验公司，进水，进食等。实验时将实验组的大鼠及对照组的大鼠分别置于两只缸中的转盘上，当电脑通过微电极监测到实验组大鼠进入慢波或快波睡眠的脑电信号后，立即发出指令使转盘转动 6 s(6 s内转动 1/3 圈)，当大鼠被转到玻璃缸壁时，因被玻璃缸壁挡住而可能掉入水中，每次在实验组睡眠剥夺大鼠进入睡眠时转盘即转动 6 s，方向随机，转盘转动时两只大鼠均被动地随着转盘移动。此方法一次只剥夺一只大鼠睡眠，当实验组的睡眠剥夺大鼠在活动、进水、进食时转盘并不转动而此时对照组的大鼠则可趁机睡觉以弥补被剥夺的睡眠。此方法中睡眠剥夺组大鼠与对照组大鼠条件极其相似，因而可减少因实验条件不同而所致的应激反应。
三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）四、实验方法及应用
1) 动物适应实验环境1周后，称重，禁食24小时。此后每天训练结束后限制性地给予正常食料（据体重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。
2) 第二天，迷宫各臂及中央区分撒着食物颗粒（每只4~5粒，直径约3~4mm）。然后，同时将4只动物置于迷宫中央（通往各臂的门打开）。让其自由摄食、探究10min。
3) 第三天，重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。
4) 第四天起，动物单个进行训练：在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒，让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。
5) 第五天，将食物放在食盒内，重复前一天的训练，一天2次。
6) 第六天以后，动物模型制作，随机选4个臂，每个臂放一颗食粒；各臂门关闭，将动物放在迷宫中央；30s后，臂门打开，让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒，直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完，则实验终止。每天训练两次，其间间隔1h以上。
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