大鼠gu髓间充质gan细胞的分离
操作方法
(1 )取SD大鼠( 2周龄)，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。
(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，细胞实验外包选哪家，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉， PBS溶液冲洗两遍。
(3 )从中间剪断股骨和胫骨，用2ml无菌注she器吸取DMEM/F 12溶液冲出gu髓细胞多次，再用针头吹打，吸管吸入离心管内，1000r/min离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞。
(4 )缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。
(5 ) 2000rpm离心15-25min，离心后溶液分4层，吸取中间骨sui基质细胞层(白色浑浊状)， PBS洗三次。
(6)用含15%胎牛xue清及青链mei素的DMEM/F 12以106/mL的细胞浓度接种于25cm2培养瓶中， 置37°C、5%CO2恒温培养箱中培养。
( 7 ) 24小时后弃去培养液(看细胞贴壁情况)，PBS冲洗2-3次去除末贴壁细胞，加入培养液继续培养。以后每3d半量换液1次，-般10d细胞生长融合。
(8 )经0.25%胰酶消化，1 : 2传代，其后一般3-5d传代1次，选取生长良好的第三代细胞进行后续实验。
软gu细胞培养
(1)豚鼠脱颈处死，备皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。
(2)无菌操作下取下双侧股骨头及膝关节(保留周围肌肉，软gu不能暴露)，细胞实验外包费用，75%酒精浸泡5分钟，转移至PBS缓冲液中，带入超净工作台，剔除关节周围附着的软组织，打开髋、膝关节，用尖刀削取关节软gu组织，置入装有PBS缓冲液的无菌培养皿，防止软gu组织被风干。
(3)PBS缓冲液充分漂洗软gu小块3次，然后用小剪刀将软gu块切碎至约Imm3大小。
(4)再次用PBS缓冲液冲洗3次，滤干，将细小的软gu块置入放有0.2%的II型胶原酶3ml的广口瓶里，细胞实验外包公司，摇匀后置于37°C恒温震荡箱中消化，40分钟后将上层消化液转移至15ml规格离心管中，800r/min离心5min，收集细胞(沉淀物)，加入含10%的胎牛xue清DMEM培养液4ml并吹打混匀，细胞实验，制成软gu细胞混悬液。
(5)把消化所得的软gu细胞混悬液收集于离心管中，经滤网过滤后用细胞计数板计数，并把细胞混悬液密度调整为2x105/ml接种于25cm2规格的培养瓶中。将培养瓶放置于CO2培养箱内。培养条件为37°C、5%CO2。
(6)未消化完的软gu小块继续用II型胶原酶如_上法消化，直至软gu块基本消失。
(7)每日在倒置显微镜下观察软gu细胞生长情况并拍照保存。
细胞实验部分设备图片
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