22.同样的OD用PAGE检测，EB染色为什么深浅不一？
答：通常可以用EB染色的方法来判断双链DNA的量(如质粒DNA)，因为EB可以嵌合到双链DNA中。而合成的单链DNA，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，EB的染色程度也会有差异，比如Oligo(dT)等不形成二级结构，阿坝pcr，EB染色效果就非常差。所以不要用EB染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。同样道理，pcr引物设计，用EB染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果？
答：引物不纯可能会导致：1)非特异性扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，特别是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？
答：如果溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mMT ris pH7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）， 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是PCR使用材料特别是模板的质量与先前使用的不完全一致。
RNA提取处理的步骤如下：
在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%（DEPC-H2O）。（DEPC二焦碳酸酯为活性很强的物，须在通风橱中小心使用）
将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC-H2O，fish检测，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中，在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。
将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中，将装有DEPC- H2O 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口，高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。
灭菌塑料制品烘烤干燥，置洁净处备用。
玻璃和金属物品250 ℃烘烤3小时以上。
RNA提取
1.弃去培养液，用PBS清洗两次1-2。
2.弃去PBS，用1000u1吸干净残余PBS。
3.加1ml TRIZOL研磨B 41。
4. 1.5mIEP管标号与每孔相对应备用。
5.研磨好的溶液转移至对应的 EP管中国。
6.往每个EP管中加入250ul，剧烈震荡30s， 冰上静置12min[问l。
7. 所有样品4C离心，转速: 13500转1分钟，时间: 15min.
8. 再次标记一批同样编号EP管。
9.离心后吸上清液400u1移入相应编号的EP管中，再加入400ul异充
分混匀。4C冰箱35min。
10. 4C离心，转速: 13500转1分钟，时间: 10min.
11.弃去.上清液，加1m175%乙醇，轻摇7]。
12. 4C离心，10600转/分钟，时间: 5min.
13. 弃上清液滤纸吸干。
14. 加DEPC水10ul溶解，-80C保存。进行逆转录前测浓度。
组织RNA提取
1、剪米粒大小组织块放入EP管中标号。
2、EP管中加300ul trizol浸泡30分钟或更久。
3、用研磨棒研磨，以肉眼很难看到组织为宜。
4、加700u1 trizol静 置5分钟。
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