RIP
技术概述
RIP是研究体内蛋白与RNA互作的重要技术。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物,裂解细胞后,用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀,获得“靶蛋白-RNA”互作复合物,去交联分离其中的RNA;针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物,荧光定量pcr,
做qPCR实验,验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合,或者将分离出来的RNA做高通量测序,筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。
技术流程
细胞交联-→细胞裂解-→免l疫共沉淀→去交联→RNA分离→建库→高通量测序(或qPCR)。
活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,pcr引物设计,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。
一、注意事项
1、探针装载后,山东pcr,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
2、探针装载完毕并洗净残余探针后,基因检测多少钱,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。
3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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